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技術(shù)服務(wù)

研究方法

01 技術(shù)原理

DNBelab C4技術(shù)是基于負(fù)壓的液滴微流控系統(tǒng)，通過引入自主專利的液滴標(biāo)簽技術(shù)（Disc-seq:Droplet-indexed high-throughput single-cell sequencing），將帶有標(biāo)簽的捕獲磁珠與單個(gè)細(xì)胞或者細(xì)胞核包裹在液滴中，采用Droplet index的技術(shù)實(shí)現(xiàn)磁珠的超泊松分布，在液滴中完成細(xì)胞裂解和捕獲mRNA或DNA分子及用于識(shí)別來自同一液滴磁珠的標(biāo)簽序列，對(duì)cDNA和Droplet index進(jìn)行文庫構(gòu)建和測(cè)序，即可一次性獲得大量細(xì)胞的基因表達(dá)或染色質(zhì)開放區(qū)基因信息。此技術(shù)與常規(guī)液滴單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)如Drop-seq平臺(tái)1%-3%的細(xì)胞回收率相比，回收率提高至30%-60%，顯著提高了細(xì)胞的利用率，降低了單次細(xì)胞投入量。

02 技術(shù)流程

單細(xì)胞測(cè)序的一般流程包括細(xì)胞懸液制備、單細(xì)胞分離、裂解、擴(kuò)增、建庫、測(cè)序、數(shù)據(jù)分析等步驟。

scRNA-seq

該技術(shù)基于便攜的負(fù)壓裝置將帶有標(biāo)簽的mRNA捕獲磁珠與單個(gè)細(xì)胞或者細(xì)胞核包裹在液滴中，采用Droplet index的技術(shù)實(shí)現(xiàn)磁珠的超泊松分布，在液滴中完成細(xì)胞裂解和捕獲mRNA分子及用于識(shí)別來自同一液滴磁珠的標(biāo)簽序列，對(duì)cDNA和Droplet index進(jìn)行文庫構(gòu)建和測(cè)序，即可一次性獲得大量細(xì)胞的基因表達(dá)信息。

圖1 基于自主標(biāo)簽技術(shù)（Disc-seq）的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù) scRNA-seq

scATAC-seq

單細(xì)胞ATAC-seq從組織或細(xì)胞富集細(xì)胞核，然后利用Tn5轉(zhuǎn)座酶對(duì)染色質(zhì)開放區(qū)進(jìn)行切割，通過DNBelab C4單細(xì)胞設(shè)備，包裹轉(zhuǎn)座后的細(xì)胞核和帶有標(biāo)簽的磁珠，在液滴內(nèi)完成染色質(zhì)開放區(qū)的富集和擴(kuò)增，后續(xù)可根據(jù)高通量測(cè)序流程制備文庫并進(jìn)行測(cè)序及生信分析，轉(zhuǎn)座后細(xì)胞核投入芯片5,000-15,000，獲取1,500-9,000細(xì)胞，雙包率 <5%。